选择性凋亡DNA Ladder抽提试剂盒

1417-选择性凋亡DNA Ladder抽提试剂盒

目录号：1417

目录编号	包装单位
141701	25次
141702	50次

产品介绍：
凋亡(apoptosis)或程序性死亡的细胞一个形态学的显著特点是染色体DNA以核小体为单位（185 bp）规律断裂形成长度约为n×185bp (n=1,2,3,4…) 的DNA片段，经琼脂糖凝胶电泳显示为阶梯状凋亡DNA Ladder，是凋亡细胞最直观的特征。本试剂盒选择性从组织和细胞中分离提取凋亡DNA ladder，通过选择性分离基因组DNA与凋亡DNA ladder，最大限度的减少了基因组DNA对凋亡DNA ladder的观察干扰，因此显著的提高了检测敏感度，反应可在微量离心管进行，2.5小时完成，快速方便；无需有机抽提，检测灵敏度极高，可从约2000个凋亡细胞中检测到DNA ladder。推荐起始细胞量为5～10 × 10⁵ 个，但投入的细胞量可在1 × 10⁵ ~ 5 × 10⁶之间变化。原则是总细胞中应含有至少约1～2 × 10⁴个凋亡细胞。多于2 × 10⁴个凋亡细胞通常可获得十分清晰的凋亡DNA ladder。本试剂盒也可用于从组织中提取凋亡DNA ladder。但与培养细胞相比，整体动物组织凋亡细胞出现的时间、部位、程度等规律性差往往造成难以准确取材，可能显著影响实验结果。但只要组织确实发生凋亡，有经验的用户也可以使用本试剂盒从组织提取凋亡DNA ladder (参见说明4)。

产品说明：
1.溴化乙锭染色过度将降低DNA条带检测灵敏度，可用水冲洗凝胶10～30分钟。如冲洗过头可再用溴化乙锭复染。可用更灵敏的DNA染色剂SYBR Green。也可进行丙烯酰胺DNA凝胶电泳和DNA银染。
2.对细胞进行干预处理后，凋亡可能仅在某一时间点或某一干预强度下最为明显。需要进行预试验确定最佳干预时间或强度。此时也可用凋亡小体/hoeschst染色试剂盒(DN1801)快速染色凋亡小体观察。
3.推荐起始细胞量为5～10 × 10⁵ 个，但投入的细胞量可在1 × 10⁵ ~ 5 × 10⁶之间变化。原则是总细胞中应含有至少约1～2 × 10⁴个凋亡细胞。多于2 × 10⁴个凋亡细胞通常可获得十分清晰的凋亡DNA ladder。六孔板的一个孔相当于一个35 mm培养皿长满后可得到1～10 ×10⁵ 个细胞，如果细胞凋亡发生率为10%，经过处理可得到约1～10 × 10⁴个凋亡细胞，应该足以获得清晰的凋亡DNA ladder。反之如果不能从>3 ×10⁶个细胞获得清晰的凋亡DNA ladder，表明其中凋亡细胞少于1%。此时增加细胞用量也难已奏效。
4.从组织块提取凋亡DNA ladder。取10～20 mg组织块放入小玻璃匀浆器，加100～200μl Extraction buffer，上下手动匀浆15～20次。取出匀浆液，冰上5～10 min。振荡10秒。4500 rpm 10分钟收集上清液并转移到新1.5ml离心管，执行提取步骤3。另外一种方法是将30～50mg组织剪碎后在PBS里面匀浆，制成细胞悬液，离心收集细胞后接步骤2继续执行提取。
5.采用高质量琼脂糖，使用宽度较小和厚度较窄的样品梳子，制作较薄的琼脂糖凝胶(厚度约2～4 mm)；用较低的电压进行慢速电泳，将显著增加凋亡DNA条带检测灵敏度。电泳距离不要太长，否则将使小的凋亡DNA条带弥散而降低分辨率。

注意事项：

   为保持活性方便运输，Enzyme B客户收到时为冻干粉，收到后加500µl灭菌水（25次）或者1ml灭菌水（50次）溶解后－20 ºC保存。Enzyme A和Enzyme B为酶溶液，应该避免反复冻融降低活性，如果要分多次使用，最好按照每次使用量分装后－20 ºC保存。